人体每天都会产生上亿个死亡细胞。将旧细胞清除，给新的细胞留出位置，才能够使组织或器官保持活力与稳态。如果清除过程不顺利，则有可能会导致不良后果，如系统性红斑狼疮诱因之一就是凋亡细胞的积累诱发细胞继发性坏死，释放与损伤相关的分子模式，导致大范围的炎症反应。因此，清除死亡细胞对维持体内平衡具有重要意义。

• 垂死细胞躲猫猫？Find！

垂死细胞会释放出可溶性介质，这些介质中就包含让吞噬细胞识别的 “Find me” 信号，包括核苷酸 (如 ATP, UTP)、膜脂 (如磷酸鞘氨醇)、趋化因子 (如 CX3CL1) 等。这些信号不仅能吸引吞噬细胞，还能使吞噬细胞做好 “作战” 的准备，例如增强吞噬受体和消化机制的表达。

图 1. 吞噬细胞识别凋亡细胞^[1]

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图 2. 吞噬细胞结合凋亡细胞^[1]

吞噬细胞直接 (BAI1, TIM1) 或间接 (AXL, MerTK) 识别凋亡细胞表面的 PS，激活 ELMO 和 DOC 蛋白的表达，进而激活 GTPase RAC1，增强肌动蛋白重塑和吞噬杯的形成。健康细胞表面的 CD47 能阻止被吞噬

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• 垂死细胞的吞噬

常规的胞葬作用研究是在体外进行，例如使用原代人巨噬细胞和凋亡 Jurkat T 细胞进行免疫荧光染色后，可在显微镜下观察到胞葬作用的过程^[3]。但由于凋亡细胞易被清除，在体内检测仍是个巨大的挑战。不过，办法总比困难多嘛~

Raymond 等人开发了一种基因编码的荧光报告基因 CharON，实现了在果蝇胚胎发育过程中胞葬作用的活细胞追踪^[4]。这一研究结果于今年 3 月发表在 Science 杂志上。

研究者们首先设计了针对细胞凋亡和胞葬作用的传感器。针对细胞凋亡，他们设计了 一种绿色荧光蛋白 (GFP) 探针。细胞凋亡时表达的 caspases 3/7 能切割 GFP，使之发出荧光 (图 5a)；GFP 在溶酶体的酸性条件下易淬灭，经突变 Q204H 基因后， GFP 对 pH 耐受。经过以上改造，他们设计出 pH 耐受的绿色荧光探针 pH-CaspGFP——它能准确地报告凋亡的细胞。针对吞噬作用，他们设计了一种新的红色荧光 pH 值传感器 pHlorina，它随着 pH 值的降低而增加荧光强度。最后将这两种传感器结合起来，获得探针 “CharON” (图 5b)。CharON 转基因的细胞，在凋亡时首先发绿色荧光，在被吞噬并在溶酶体内酸化后，随着 GFP 逐渐淬灭，pHlorina 的红色荧光强度增加。CharON 将连续性细胞事件可视化。