柱式超纯多糖多酚植物RNA小提试剂盒 
柱式超纯多糖多酚植物RNA小提试剂盒
产品说明：
本产品采用了独特的裂解系统，无需使用苯酚氯仿抽提，可以对各种简单植物组织材料（如叶 片、茎、幼苗等）进行 RNA 的提取。优化的裂解系统尤其适合富含多糖多酚的植物组织样品（如 果实、种子等）、真菌等进行 RNA 的提取，适用范围更加广泛。 本试剂盒操作方便快速，提取的 植物 RNA 纯度高，极少含蛋白质、基因组 DNA 和其它杂质的污染，可直接用于 RT-PCR、 Northern blot、Real Time PCR、构建 cDNA 文库等实验。
使用方法：
自备材料：β-巯基乙醇。
1. RNase-free DNase 母液的配制：用 1mL RNase-free 注射器抽取 550 µL RNase-free ddH2O，打 进装有 RNase-free DNase（2000U）干粉的玻璃瓶中，轻柔混匀溶解，分装后-20℃保存（可保存 9 个月）。
注：从-20℃融化后的 RNase-free DNase 母液保存于 4℃（可保存 6 周），不要再次冻存。
2. 裂解液可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请于 60℃加热溶解，然后待恢复至室温后使用。 操作前请根据样品数量，按照 1 mL 裂解液中加入 50 µL β-巯基乙醇的比例，配制裂解液。配好的裂 解液可在 4℃放置 1 个月。
3. 使用前请在漂洗液 2（WB2）中按瓶标加入无水乙醇，并做好标记。
操作步骤
1. 柱平衡：向离心吸附柱中加入 500 µL 柱平衡液，12000 rpm 离心 2 min，倒掉收集管中的废 液。
2. 取 500 µL 裂解液（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇）加入到 1.5 mL RNase-free 离心 管中。组织样品经液氮研磨后，将研磨成粉末状的样品（50-100 mg）加入到上述含有 500 µL 裂解 液的 1.5 mL 离心管中，涡旋剧烈震荡混匀直至裂解液中无明显沉淀。 注 ：对于预期 RNA 得率小于 10 µg 的样本，请使用 100 mg 的样本量；对于富含淀粉的样本 或成熟叶片，请将裂解液用量增加至 700 µL 。
3. 12000 rpm 离心 2 min。
4. 将过滤柱放入收集管中，然后将上一步离心收集的上清液用移液器转移到过滤柱中，12000 rpm 离心 2 min，小心吸取 收集管中的滤液至新的 1.5 mL RNase-free 离心管中，吸头尽量避免接触 收集管中的细胞碎片沉淀。
5. 缓慢加入 0.4 倍滤液体积的无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀），将得到的溶液和沉淀 一起转入离心吸附柱（吸附柱 放在收集管中），12000 rpm 离心 15 s，弃除收集管中的废液，将吸 附柱放回收集管中。
6. 向吸附柱中加入 350 µL 漂洗液 1（WB1），12000 rpm 离心 1 min，弃除收集管中的废液， 将吸附柱放回收集管中。
7. RNase-free DNase工作液配制：取10 µL RNase-free DNase母液放入新的RNase-free离心管中， 加入 70 µL 膜反应液，轻柔混匀。
8. 向吸附柱中央加入 80 µL RNase-free DNase 工作液，室温放置 15 min。
9. 向吸附柱中加入 350 µL 漂洗液 1（WB1），12000 rpm 离心 1 min，弃除收集管中的废液， 将吸附柱放回收集管中。
10. 向吸附柱中加入 500 µL 漂洗液 2（WB2）（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），室温 放置 2 min，12000 rpm 离心 1 min，弃除收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
11. 重复操作步骤 10 一次。
12. 将吸附柱放回收集管中，12000 rpm 离心 3 min。此步骤十分重要，否则残留的乙醇（漂洗 液（WB2）中的成分）会影响 RNA 的使用。
13. 将吸附柱放入一个新的 1.5 mL RNase-free 离心管中，室温放置 2 min，向吸附膜中央加入 50-100 µL RNase-free ddH2O，室温放置 1 min，12000 rpm 离心 1 min，得到 RNA 溶液。所得 RNA 溶液应立即使用或适量分装后存放于-80℃待用。
注意事项：
1． 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放 于普通住宅区。
2． 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
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